Azt hiszem az lesz a legegyszerűbb, ha elejétől a végéig elmesélem, hogy is zajlik egy fermentáció és az egyes részeknél részletezem, hogy milyen adatok keletkeznek, amit majd kezelni kell. Ez a későbbiekben egy jó kiindulási alap lesz, hogy demonstrálja az információ áramlást és a megértést két különböző tudományterület között. Jelen esetben egy fermentáció közben képződő adatmennyiséget kell megfelelő módon adatbázisban eltárolni, a képződött adatokon matematikai műveleteket végrehajtani, azokat ábrázolni, értékelni, más adatokkal összehasonlítani.
Első és második nap (inokulum készítés)

1. Colonies
A törzsfejlesztő csoporttól megkapjuk a genetikailag módosított törzset. Az 1-es képen az egy Petri-csésze, ami kb. 2/3-ig valamilyen tápközeggel LB-agar vagy MM-agar van töltve, ez egy szilárd tápközeg, ami mindenféle anyagot tartalmaz, ami a kívánt mikroorganizmus szaporodásához szükséges. Itt tehát tudnak szaporodni és úgynevezett telepeket képeznek, amik milliós nagyságrendben tartalmaznak élő sejteket. Ami információt innen le kell menteni, az az, hogy mikor szélesztették a sejteket, ez azért fontos, hogy tudjuk milyen idős a telep. Ahhoz, hogy
rendesen megnőjenek 1-2 napig kell őket inkubálni 370C-on. Optimális esetben mi vesszük ki az inkubátorból, és visszük a következő lépésbe, de előfordul, hogy pár napot állnak a hűtőben. A következő lépésben oltókaccsal kiemelünk egy telepet és LB, vagy MM tápoldatban elszuszpendáljuk. Ez úgy történik, hogy van egy 50ml-es Falkon cső, amiben 10ml tápoldat van. Az oltókaccsal felveszünk egy telepet, vagy akár többet és átvisszük a tápoldatba, kicsit megrázzuk, hogy a sejtek leoldódjanak. Ezt nevezzük inokulum 1.-nek, van, hogy ezzel oltjuk be a fermentort, ha a kezdő térfogata 100-200ml, de, ha nagyobb a fermentorunk, akkor egy második inokulumot is kell készítenünk, mivel arányosan nagyobb térfogatot kell használnunk az inokulomból. Ehhez egy kicsit nagyobb, úgynevezett módosított Erlenmeyer lombikot használunk, ebben az esetben egy 250ml-est, amiben 40ml tápoldat van, ezt oltjuk be a korábban készített inoculum 1-el. Az inokulum 1 esetében, mivel a kezdeti sejtszám igen kicsi ezért ezt min. 12 órát, az inokulum 2-t 5-8 órát inkubáljuk, itt mi állítjuk be a kezdeti sejtszámot. Az inokulum kettő esetében, ahol ismerjük a kezdeti, valamit a végső sejtszámot, így lehetőségünk van ebből növekedési paramétereket számolni, úgymint a maximális növekedési rátát, vagy a generációs időt, amik a törzsünkre jellemző paraméterek és fontosak a fermentáció megtervezésénél. Visszakanyarodva az inokulum 1-hez, amit beoltottunk és 16 órát 33oC-on inkubáltunk. Egy zavaros tejszerű szuszpenziót kapunk, aminek meg kell határozni az OD600 (Optical Density) értékét. 600, mert ezen a hullámhosszon végezzük a mérést. Lényegben egy spektrofotometriás módszer, aminek a lényege, hogy minél nagyobb a sejtsűrűség annál kevesebb fény jut át a küvettán, amiben a 10-szeresére hígított fermentlevet vizsgáljuk.
Összefoglalva nézzünk egy konkrét példát, hogy lássuk milyen és mennyi adat keletkezik.
LB-agaron megkaptuk a GG1245 nevű genetikailag módosított E.coli mutánsunkat, amiből elindítottuk az inokulum 1-et, 16 órán keresztül 330C-on inkubáltuk, majd megmértük az OD600 értékét. Ebből egy második inokulumot indítottuk, amit 6 órán keresztül 33oC-on inkubáltunk, majd ennek is megmértük az OD600 értékét. Ismeretlen törzsek esetében többszörös mintavétel is szükséges, mondjuk óránként, ami alapján a növekedési görbét is fel tudjuk venni, de ezen adatokat majd külön kezeljük.
Inokulum/általános adatok |
|
Szélesztés időpontja |
Antibiotikum |
Tápközeg |
Plate |
2018-05-24 |
Nem |
LB-agar-glükóz |
|
Használt inokulum |
Beoltás időpontja |
Antibiotikum |
Tápközeg |
Inokulum térfogata [ml] |
Teljes térfogat [ml] |
Inkubációs idő [h] |
Hőm. [oC] |
OD |
Inokulum 1. |
Plate |
2018-05-25 12:22 |
Nem |
LB-glükóz |
– |
10 |
18 |
33 |
4 |
Inokulum 2. |
Inoc. 1. |
2018-05-26 09:22 |
Nem |
LB-glükóz |
2 |
40 |
5,17 |
33 |
1,6 |
Beviteli mezők összesen 21 db |
Ezek lesznek az alapértelmezett beviteli mezők, de ezek mellett természetesen lehetőséget kell adni a felhasználónak, hogy ezt kedvükre változtathassák, oszlopokat, sorokat tudjanak hozzáadni vagy elvenni. Egy másik, de ehhez kapcsolódó almenü, ami szervesen kapcsolódna ide lehetőséget adna az OD értékének követésére az idő függvényében. Ezen menük a GUI bal oldalán lennének elhelyezve a következő elrendezés szerint. A kiinduló pont lenne maga a fermentációnak a sorszáma, vagy egy jegyzőkönyv szám.
GGF-18311
- Fermentációs paraméterek
- Média összetétel
- Média összetétel anyagmérleg
- Inokulum
- Általános adatok
- Növekedési paraméterek
- Online adatok
- Offline adatok
- Kiértékelés, konklúzió
Ismeretlen törzsek esetében fontos meghatározni a növekedési paramétereket mielőtt elkezdjük a fermentációt, ez hasonlóan megy mint ahogy előbb leírtuk, a különbség csak annyi, hogy itt az inokulum 2. esetében több mintát veszünk, általánosan minden órában.
Inokulum/növekedési paraméterek |
|
Beoltás időpontja |
Inokulum térfogata [ml] |
Teljes térfogat [ml] |
Inoculum 1. OD |
Tápközeg |
Antibiotikum |
Hőmérséklet [oC] |
Paraméterek |
2018-05-26 09:22 |
2 |
40 |
4 |
LB-glükóz |
Nem |
33 |
|
|
Idő [h] |
OD600 |
Generációs idő |
Növekedési ráta |
Generációk száma |
Megjegyzés |
Mérési adatok
|
0 |
0,2 |
|
|
|
|
1,17 |
0,3 |
|
|
|
|
2,33 |
0,4 |
|
|
|
|
3,33 |
0,7 |
|
|
|
|
4,33 |
1,1 |
|
|
|
|
5,17 |
1,6 |
|
|
|
|
Beviteli mezők összesen 25 db |
Matematikai műveletet tartalmazó mezők összesen 19 db |
Az OD értékét a 0 időpillanatban az ismert adatok alapján automatikusan kiszámoltathatjuk. Az inoculum 1-ből 2 ml-t használunk, hogy beoltsuk az inoculum 2-t, aminek a teljes térfogata 40ml. 40ml/2ml = 20, ami a hígítás mértéke. Az inoculum 1. OD-ja négy, így ha ennek 2 ml-ét 20-szorosára hígítjuk 0,2 kapunk, ami a inoculum 2. kiindulási OD értéke.
\[ OD_{t=0}=\frac{4}{\frac{40}{2}} = \frac{2}{40}*4 = 0.2 \]
A generációs idő számítása
\[ G=\frac{t}{3.3log\left ( \frac{N}{N_{0}} \right )} \]
Növekedési ráta számítása
\[ \mu = \frac{ln\left ( \frac{N}{N_{0}} \right )}{t} \]
Generációk száma
\[ n=\frac{t}{G} \]
Egy korábban készített online kalkulátor ITT kipróbálható.
Ugyanezen a kezelőfelületen ugyancsak szükséges grafikusan is ábrázolni a mért értékeket, amit a riport részbe szintén át kell tudni majd emelni. Erre van egy plugin, amit itt használok, ez majdnem megfelel. Ezt két funkcióval kellene kiegészíteni, az egyik a többszörös y-tengely, a másik, hogy lehessen trendvonalat illeszteni a görbékhez, valamint megjeleníteni az ehhez tartozó egyenletet. A két leggyakrabban használt trendvonal a lineáris és az exponenciális.
Akár azon is elgondolkodhatunk, hogy a mért értékeket valamilyen külső programba API-n keresztül továbbítsuk, amivel komolyabb matematikai műveleteket is végre lehet hajtani. Itt egy példa, ez a Plotly-val készült.

Exponenciális függvény egyenlete
\[ y=0.084+0.112*\exp(0.505*x) \]
|
\[ x = \frac{ln\left ( \frac{y-0.084}{0.112} \right )}{0.505} \]
|
Lineáris függvény egyenlete fél logaritmikus
\[ y=0.404*x-1.682 \]
|
\[ x=\frac{y+1.682}{0.404} \]
|
Ebből az OD értéke
\[ OD =e^{y} \]
Amelyik összefüggést még jó ha tudjuk, a növekedési ráta egyenlő a tgα értékével
\[ tg\alpha = \frac{a}{b} = \mu \]
A második nap végére elkészül az inokulum 2. amit majd a nagy fermentor beoltásához fogunk használni. Remélem nem volt nagyon megterhelő, mert ami ezután következik, abban nem lesz köszönet. Mondhatjuk, hogy szívás ez az egész tudomány dolog és jobb lett volna, ha valami más szakmát választottunk volna. Egyszer a főnököm megkérdezett minket, hogy milyen más szakmát választanánk ehelyett, az egyik munkatársam kamion sofőr akart lenni és szívesen lennék kertész.
Második nap (fermentor előkészítése és beoltása)
Vagy négy év volt, (egyetem után) mire teljesen átláttam az egész folyamatot és magabiztosan tudtam használni a fermentorokat, kalibrálás, beállítás, hibaelhárítás, receptírás, kísérlettervezés meg a társai. Most pedig itt állunk és próbáljuk megtervezni a saját fermentorunkat szoftverestől, hardverestől, edényestől, vagyis mindenestől, nem vagyunk normálisak.
A második nap végére, mire az inokulum 2 elkészül, sok mindennel meg kell lenni, először is el kell készíteni a tápközeget, ezzel folytatjuk most.
Média összetétel menü |
Dátum |
2018-05-26 |
|
Operátor |
KM |
|
Sarzs szám |
GGF-18311 |
|
|
Média összetétel |
Végtérfogat [L] |
1 |
|
Név |
Képlet |
Móltömeg [g/mol] |
Koncentráció [g/L]; [ml/L] |
Mólkoncentráció [mmol/L] |
Bemérendő |
Mértékegység |
Gyártási szám |
Disodium hydrogen phosphate |
Na2HPO4 |
141,96 |
6 |
42.27 |
6 |
g |
WTY235687 |
Potassium dihydrogen phosphate |
KH2PO4 |
136,086 |
3 |
22.04 |
3 |
g |
ZHU364548 |
Ammonium chloride |
NH4Cl |
53,49 |
1 |
18.70 |
1 |
g |
uhz12548 |
Sodium chloride |
NaCl |
58,4 |
0.5 |
8.56 |
0.5 |
g |
ugdt125487 |
Magnesium sulfate |
MgSO4 |
120,366 |
1 |
8.31 |
1 |
g |
gtf125484 |
Trace mineral solution |
Complex |
– |
10 |
– |
10 |
mL |
TMS011 |
Polypropylene glycol |
– |
– |
200 |
– |
– |
µL |
125487 |
A sókat ennyi ioncserélt vízben kell feloldani |
879 |
mL |
Glükóz |
C6H12O6 |
180,156 |
20 |
111.01 |
20 |
g |
|
A szénforrást ennyi vízben kell feloldani és autóklávozás után külön hozzáadni a fermentorhoz. |
100 |
mL |
Thiamine (vitamin) |
C12H17N4OS+ |
265.35 |
0.012 |
0.045 |
12 |
mg |
|
Sterilre szűrés után adjuk a fermentorhoz |
1 |
mL |
|
|
Extra tápanyag |
Végtérfogat [L] |
1 |
|
Glükóz |
C6H12O6 |
180,156 |
400 |
2220.30 |
400 |
g |
|
A szénforrást ennyi vízben kell feloldani és autóklávozás után összeönteni a sóoldattal |
600 |
mL |
Magnesium sulfate |
MgSO4 |
120,366 |
13 |
108 |
13 |
g |
|
Ammonium-sulfate |
NH4SO4 |
132,14 |
4 |
30.27 |
4 |
g |
|
TMS |
Complex |
– |
50 |
– |
50 |
mL |
|
Polypropylene glycol |
– |
– |
2 |
– |
2 |
mL |
|
A sókat ennyi ioncserélt vízben kell feloldani és autóklávozás után összeönteni a szénforrást tartalmazó oldattal |
350 |
mL |
Média összetételből nyíló 2. almenü.
A Trace mineral solution almenü |
Dátum |
2018-04-19 |
|
Operátor |
KM |
|
Sarzs szám |
TMS012 |
|
|
TRACE MINERAL SOLUTION |
Végtérfogat [L] |
1 |
|
Név |
Képlet |
Móltömeg [g/mol] |
Koncentráció [g/L]; [ml/L] |
Mólkoncentráció [mmol/L] |
Bemérendő |
Mértékegység |
Gyártási szám |
Manganese(II) sulfate hydrate |
MnSO4.H2O |
151.00 + 18.015 |
0.5 |
3.31 |
0.56 |
g |
|
Iron(II) sulfate heptahydrate |
FeSO4.7H2O |
151.91 + 126.105 |
2 |
13.17 |
3.66 |
g |
|
Ammonium molybdate |
(NH4)2MoO4 |
196.01 |
0.1 |
0.51 |
0.1 |
g |
|
Zinc sulfate heptahydrate |
ZnSO4.7H2O |
161.47 + 126.105 |
0.3 |
1.58 |
0.3 |
g |
|
Copper (II) sulfate pentahydrate |
CuSO4.5H2O |
159.61 + 90.08 |
0.1 |
0.63 |
0.1 |
g |
|
Beviteli mezők összesen 29 db |
Matematikai műveletet tartalmazó mezők összesen 33 db |
Ennek az értéke a végtérfogat értékének a függvénye összesen 2 db |
Legördülő menü választási opcióval összesen 14 db |
Ehhez tartozik egy almenü, ami részletesen definiálja az összetételét összesen 1 db |
Automatikusan kitöltődő mező függően a Név mezőtől összesen 28 db |
Itt az összes esetben csak egyszerű matematikai műveletekről van szó, a móltömeg kiszámításánál egy egyszerű osztás, ha kristályvizet tartalmaz a só, akkor pedig többet kell bemérni, ez sem bonyolultabb.
\[ n=\frac{m}{M} \]
|
\[ m_{cryst.}=\frac{m_{anhyd.}*M_{cryst.}}{M_{anhyd.}} \]
|
A következő menüpont már a kiértékelés része, itt lehet részletes információt kapni az ion összetételről, azt összevetni online mérési adatokkal. Itt a Média összetétel egyes celláiból kiolvasott értékeket összegzi pl. összes NH4+, Mg2+, Na+, PO43- ezeket lehetőség van összevetni online mérési eredményekkel. Továbbá lehetőség van a pH beállításhoz használt sav, lúg iontartalmát automatikusan hozzáadni az anyagmérleghez.
Mielőtt belekezdenénk a következő táblázatba, nézzük, hogy is állunk. Megcsináltuk tehát a Tápközeget a Média összetétel adatlap alapján, amit korábban kitöltöttünk, ehhez kell majd rendelni egy számot, mondjuk M1. Ez definiálja a Média összetételét, ha ezen változtatunk, mert mondjuk a fermentáció 60. órájában elfogy a PO43+, akkor a következő M2-ben megemeljük a foszfát mennyiségét. Itt mindenképpen kizárólag egy paraméter szabad változtatni, hogy a kiinduló Média összetételből a továbbiak könnyen leszármaztathatóak legyenek. M1-hez rendeljünk hozzá egy koncentráció értéket mondjuk 18g/L, amit 50 óra után értünk el. A megfigyelésünk szerint a 40, órában már alacsony volt a PO43+ szint, ezért következőleg a kezdeti médiában eleve megemeltük ennek koncentrációját. M1-ben a Potassium dihydrogen phosphate (legyen x) kezdeti koncentrációja 3g/L, amit az M2-ben megemeltünk 4 g/L-re (x+1), ahol azt tapasztaltuk, hogy a koncentráció az 50. órában 22g/L lett 1,33-szor annyi Potassium dihydrogen phosphate használatával, ennek következtében 1,22 szeresére nőtt a termelés. Erre kellene ráhúzni egy matematikai összefüggést, ha mondjuk M1-et akarjuk összehasonlítani az M65-el.
Ebben az almenüben találjuk a teljes anyagmérleget.
Média összetétel anyagmérleg |
|
g/mol |
weight (g) |
mmol |
Individual ions |
Na2HPO4 |
|
2Na+ |
H+ |
PO43- |
Disodium hydrogen phosphate |
141,96 |
6 |
42.27 |
84.54 |
42.27 |
42.27 |
|
KH2PO4 |
|
K+ |
2H+ |
PO43- |
Potassium dihydrogen phosphate |
136,086 |
3 |
22.04 |
22.04 |
44.08 |
22.04 |
|
NH4Cl |
|
NH4+ |
Cl– |
|
Ammonium chloride |
53,49 |
1 |
18.70 |
18.70 |
18.70 |
|
|
NaCl |
|
Na+ |
Cl– |
|
Sodium chloride |
58,4 |
0.5 |
8.56 |
8.56 |
8.56 |
|
|
MgSO4 |
|
Mg2+ |
SO42- |
|
Magnesium sulfate |
120,366 |
1 |
8.31 |
8.31 |
8.31 |
|
|
Complex. |
Mn2+ |
Fe2+ |
MoO4– |
Zn2+ |
Cu2+ |
SO42+ |
Trace mineral solution |
0.005 |
0.02 |
0.001 |
0.003 |
0.001 |
0.029 |
|
NH4+ |
0.002 |
|
C6H12O6 |
|
|
|
C6H12O6 |
|
|
Glükóz |
180,156 |
|
|
111.01 |
|
|
|
C12H17N4OS+ |
|
|
|
C12H17N4OS+ |
|
|
Thiamine (vitamin) |
265.35 |
|
|
0.045 |
|
|
C12H17N4OS+ |
|
|
|
C12H17N4OS+ |
|
|
Thiamine (vitamin) |
265.35 |
|
|
0.045 |
|
|
|
|
|
Extra tápanyag |
|
|
|
|
|
|
g/mol |
weight (g) |
mmol |
Individual ions |
|
|
C6H12O6 |
|
|
|
|
|
|
Glükóz |
180.156 |
400 |
2220.30 |
|
|
|
|
MgSO4 |
|
|
|
Mg2+ |
SO42- |
|
Magnesium sulfate |
120.366 |
13 |
108 |
108 |
108 |
|
|
NH4SO4 |
|
|
|
NH4+ |
SO42- |
|
Ammonium-sulfate |
132,14 |
4 |
30.27 |
30.27 |
30.27 |
|
|
Complex. |
Mn2+ |
Fe2+ |
MoO4– |
Zn2+ |
Cu2+ |
SO42+ |
Trace mineral solution |
0.025 |
0.1 |
0.005 |
0.015 |
0.005 |
0.145 |
|
NH4+ |
0.01 |
Itt lehet még fokozni a dolgot, hogy az egyes ionok összes koncentrációját is lehessen látni, sőt azt is, hogy a feed batch szakaszban hogyan változik az ionkoncentráció, de ezt majd később.
A Média összetétel menü függvénye db |
Matematikai műveletet tartalmazó mezők összesen db |
Összefoglalás képen csak annyi, hogy ezek a menük mindannyian a Fermentációs paraméterek főmenüből származtathatóak, amit nevezzünk mester dokumentumnak. Ez a mesterdokumentum tartalmaz minden adatot a fermentációs paraméterektől kezdve, mint pH, pO2, keverés sebessége, tápanyag adagolás sebessége, tartalmazza a média részletes összetételét. Ezt a dokumentumot a kísérlet megtervezője állítja össze, ennek van egy azonosítója mondjuk M és egy száma, ami a változást jelzi az előzőhöz képest, legyen az első M1. Az M1-hez tartozik mondjuk 10 változó, ha változtatunk valamelyiken M2-t kapunk.
|
M1 |
M2 |
M3 |
M4 |
A |
2 |
3 |
3 |
3 |
B |
2 |
2 |
3 |
3 |
C |
2 |
2 |
2 |
3 |
D |
2 |
2 |
2 |
2 |
E |
2 |
2 |
2 |
2 |
F |
2 |
2 |
2 |
2 |
G |
2 |
2 |
2 |
2 |
H |
2 |
2 |
2 |
2 |
I |
2 |
2 |
2 |
2 |
Ehhez matematika egyenletet tudunk rendelni, az alapján, hogy az M1-es eljáráshoz a fermentáció 90. órájában 10g/L-es produktivitás társult, az M2-hez 12g/L, ez 16,7%-os javulást jelent. Ez annak volt köszönhető, hogy az A változó értékét megemeltük egyel.
M2 = M1(A+1)
Ezt is majd később részletezzük. Megvan tehát a mester dokumentum az M1-M4. Szeretnénk indítani egy fermentációt az M2-es eljárás szerint. A bal oldali menüsávból elindítjuk a fermentáció indítása varázslót, itt definiálnunk kell a fermentáció számát, ami az előzőek alapján GGF-18311. Ezzel egy aktív fermentációs eljárást indítunk, itt ha megadjuk a mesterdokumentum számát, amit hozzárendelünk ehhez a fermentációhoz. Az online paramérerek automatikusan beállítódnak, (keverés sebessége, pH stb.) a média összetétel form automatikusan kitöltődik, ami alapján elkészítjük majd a tápközeget. Ezután következik a szenzorok kalibrálása, mint a pH és az oxigén szenzoré.
A média elkészítéséhez az egyes anyagok bemérését olyan mérlegen végezzük, ami kapcsolódik egy Raspberry pi-hez, ami kiolvassa az értéket és http-n továbbküldi a megfelelő fermentor egységhez, amit az IP címe definiál. Itt az adatok beíródnak a média összetétel adatlap aktív mezőjébe.
Mester file |
Név |
Képlet |
Móltömeg [g/mol] |
M0 |
M1 |
M2 |
M3 |
M4 |
Basal média |
Koncentráció [g/L]; [ml/L] |
Disodium hydrogen phosphate |
Na2HPO4 |
141,96 |
6 |
|
|
|
|
Potassium dihydrogen phosphate |
KH2PO4 |
136,086 |
3 |
|
|
|
|
Ammonium chloride |
NH4Cl |
53,49 |
1 |
|
|
|
|
Sodium chloride |
NaCl |
58,4 |
0.5 |
|
|
|
|
Magnesium sulfate |
MgSO4 |
120,366 |
1 |
|
|
|
|
Trace mineral solution |
Complex |
– |
10 |
|
|
|
|
Polypropylene glycol |
– |
– |
0.2 |
|
|
|
|
|
Autoklávozás után hozzáadandó |
|
Glükóz |
|
|
20 |
|
|
|
|
Thiamine |
|
|
0.012 |
|
|
|
|
|
Extra tápanyag |
|
Glükóz |
C6H12O6 |
180,156 |
400 |
|
|
|
|
Magnesium sulfate |
MgSO4 |
120,366 |
13 |
|
|
|
|
Ammonium-sulfate |
NH4SO4 |
132,14 |
4 |
|
|
|
|
TMS |
Complex |
– |
50 |
|
|
|
|
Polypropylene glycol |
– |
– |
0.2 |
|
|
|
|
|
Beállítások |
pH |
6,8 |
6,8 |
6,8 |
6,8 |
6,8 |
Dissovled O2 (%) |
25 |
25 |
25 |
25 |
25 |
Air Flow (l/min./l ) |
1 |
1 |
1 |
1 |
1 |
Stir (rpm) |
300 |
300 |
300 |
300 |
300 |
Temp Gr (0C) |
30 |
30 |
30 |
30 |
30 |
Temp Pr (0C) |
28 |
28 |
28 |
28 |
28 |
First feed rate (ml/l/h) |
5 |
5 |
5 |
5 |
5 |
Second feed rate (ml/l/h) |
3 |
3 |
3 |
3 |
3 |
Ezzel a végére is értünk az első két almenü a Fermentációs paraméterek és az Inokulum részletezésének. A következőekben az Online adatok, Offline adatok, Kiértékelés, konklúzió almenüket külön tárgyaljuk.
Képek forrása
1 https://www.thinglink.com/scene/893540211361841152